Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике – Статейный холдинг

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Количественная цитометрия – относительно новая методика микробиологического исследования дисперсионных сред, проводимая с помощью специального оборудования. Цитометрия бывает статической и проточной.

Статическая цитометрия проводится с использованием конфокальных микроскопов; при их отсутствии в ход идут слегка модифицированные люминесцентные микроскопы, оснащенные простыми и дешевыми системами анализа изображений.

Проточная цитометрия осуществляется на специальных аппаратах – сортерах и проточных цитрометрах.

Оба варианта количественной цитометрии имеют широчайшие возможности применения в практике медицинских и биологических исследований. Несмотря на разность используемого клинического материала и экспериментальных моделей решаемые ими задачи подчиняются общим принципам исследования.

Что такое проточная цитометрия?

Проточной цитометрией называют методику исследования дисперсионных субстанций в режиме поштучного анализа частиц, входящих в состав дисперсной фазы по сигналам, получаемым в ходе флуоресценции и рассеивания света.

Название методики точно отражает сущность обозначаемого процесса, состоящего в исследовании потока одиноких биологических частиц.

Методика проточной цитометрии была создана на базе специальных экспериментов по определению размера исследуемых частиц и подсчету их количества.

Первый клеточный сортер был создан в 1965 году, а с начала следующего десятилетия был налажен выпуск приборов, предназначенных для измерения интенсивности флуоресценции при нескольких длинах волн с целью определения сразу нескольких параметров изучаемых клеток.

Современные исследователи для осуществления проточной цитометрии используют приборы двух типов:

Устройство современных проточных цитометров настолько сложно и разнообразно, что с трудом поддается какому-либо обобщению и систематизации, однако несколько общих моментов, характерных для всех приборов, все же существует:

В ходе медицинских и биологических исследований изучаются образцы, приготовленные из клеток:

Принцип метода проточной цитометрии

Принципы, заложенные в основу процедуры цитометрии, чрезвычайно просты.

Суспензия, приготовленная из клеток, предварительно помеченных флуоресцирующими моноклональными антителами или флуорохромами, помещается в поток дисперсионной среды, пропускаемый через проточную ячейку.

Гидродинамическое фокусирование струи клеточной суспензии в струе дисперсионной среды приводит к тому, что исследуемые клетки или их ядра выстраиваются поодиночке и в таком порядке пересекают пучок сфокусированных световых (обычно лазерных) лучей.

Под воздействием определенных световых волн происходит одновременное возбуждение молекул разных флуоресцирующих красителей, что делает возможным анализ сразу нескольких параметров клеточных структур.

Свет, исходящий от флуорохромов, фокусируют при помощи оптической системы, состоящей из нескольких зеркал и линз, а затем раскладывают на определенные компоненты.

Полученные световые сигналы подвергают анализу и преобразованию в электрические импульсы, а затем – в определенные формы, приемлемые для компьютерной обработки и хранения полученной информации.

Флуорохромы

Для того чтобы облегчить процесс определения клеточных структур в ходе процедуры проточной цитометрии, используемую дисперсионную среду подкрашивают специальными флуоресцирующими красителями – флуорохромами.

После такой обработки исследуемые клетки приобретают способность флуоресцировать (светиться) под воздействием пучка световых лучей.

При выборе того или иного красителя пользуются целым рядом критериев:

Одним из самых востребованных флуорохромов является йодистый пропидий: его спектральные характеристики идеально подходят для выполнения проточной цитометрии.

Чтобы активизировать флуоресценцию, используя йодистый пропидий, исследователи прибегают к помощи обычного аргонового лазера (рабочая длина его волны составляет 480 нм). Площадь флуоресцирующего участка такова, что позволяет использовать вышеозначенный флуорохром для выполнения многопараметрических измерений.

Для проведения проточной цитометрии также используют:

В качестве флуорохромов могут использоваться также флуоресцирующие моноклональные антитела.

Вне зависимости от того, какой именно краситель принимает участие в процедуре, его количество должно быть прямо пропорционально содержанию ДНК в структуре клетки.

Чтобы добиться качественного прокрашивания всех клеточных структур, количество применяемого флуорохрома должно быть избыточным.

Большинство флуорохромов, вступающих в контакт с ДНК, не способно пройти сквозь мембраны неповрежденных (интактных) клеток. Для повышения проницаемости клеточных мембран исследуемые клетки обрабатывают поверхностно-активными веществами (детергентами) или спиртом.

Преимущества

Несомненными преимуществами проточной цитометрии можно считать:

Где применяется?

Спектр применения проточной цитометрии необыкновенно широк. Она применяется даже в индустрии, для контроля производственного процесса. Продемонстрируем это, для наглядности представив информацию в виде списков.

В онкологии

В этом разделе медицины проточную цитометрию применяют с целью:

о методе проточной цитометрии в диагностике острых лейкозов:

Иммунологии

Метод проточной цитометрии позволяет:

Цитологии

Проточная цитометрия дает исчерпывающие данные, позволяющие:

Гематологии

С помощью проточной цитометрии гематологи могут:

Фармакологии

Проточная цитометрия помогает фармакологам:

Сельском хозяйстве

Метод проточной цитометрии активно используется учеными, специализирующимися на селекции новых видов растений и выведении пород домашнего скота, поскольку она позволяет:

Сохрани статью себе в соцсеть!

Источник: https://teora-holding.ru/printsip-metoda-protochnoj-tsitometrii-v-klinicheskoj-laboratornoj-diagnostike/

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Количественная цитометрия – относительно новая методика микробиологического исследования дисперсионных сред, проводимая с помощью специального оборудования. Цитометрия бывает статической и проточной.

Статическая цитометрия проводится с использованием конфокальных микроскопов; при их отсутствии в ход идут слегка модифицированные люминесцентные микроскопы, оснащенные простыми и дешевыми системами анализа изображений.

Проточная цитометрия осуществляется на специальных аппаратах – сортерах и проточных цитрометрах.

Оба варианта количественной цитометрии имеют широчайшие возможности применения в практике медицинских и биологических исследований. Несмотря на разность используемого клинического материала и экспериментальных моделей решаемые ими задачи подчиняются общим принципам исследования.

Что такое проточная цитометрия?

Проточной цитометрией называют методику исследования дисперсионных субстанций в режиме поштучного анализа частиц, входящих в состав дисперсной фазы по сигналам, получаемым в ходе флуоресценции и рассеивания света.

Название методики точно отражает сущность обозначаемого процесса, состоящего в исследовании потока одиноких биологических частиц.

Методика проточной цитометрии была создана на базе специальных экспериментов по определению размера исследуемых частиц и подсчету их количества.

Первый клеточный сортер был создан в 1965 году, а с начала следующего десятилетия был налажен выпуск приборов, предназначенных для измерения интенсивности флуоресценции при нескольких длинах волн с целью определения сразу нескольких параметров изучаемых клеток.

Современные исследователи для осуществления проточной цитометрии используют приборы двух типов:

  • Приборы, предназначенные для измерения флуоресценции при двух (и более) длинах волн и рассеивании света под углом в десять (так называемом малоугловом прямом рассеивании) и девяносто градусов. Приборы этого типа отличаются простотой использования.
  • Довольно громоздкие клеточные сортеры, способные измерить более пяти параметров исследуемых ядер или частиц, а также отсортировать клетки, обладающие определенным набором параметров.

Устройство современных проточных цитометров настолько сложно и разнообразно, что с трудом поддается какому-либо обобщению и систематизации, однако несколько общих моментов, характерных для всех приборов, все же существует:

  • Для проведения анализа на цитометре любого типа требуется гомогенная суспензия клеток определенного типа.
  • Не должно быть недостатка в количестве исследуемых клеток или их ядер.
  • Чтобы не допустить слипания клеток, исследователь должен обладать всей полнотой информации о характере рассеивания света и иметь под рукой таблицы с соответствующими данными.

Образцы

В ходе медицинских и биологических исследований изучаются образцы, приготовленные из клеток:

  • костного мозга;
  • крови;
  • спинномозговой жидкости (ликвора);
  • синовиальной (суставной) жидкости;
  • плевральной жидкости;
  • перитонеальной (асцитической) жидкости, накапливающейся в брюшной полости в процессе развития асцита;
  • опухолевых и здоровых тканей.

Принцип метода проточной цитометрии

Принципы, заложенные в основу процедуры цитометрии, чрезвычайно просты.

Суспензия, приготовленная из клеток, предварительно помеченных флуоресцирующими моноклональными антителами или флуорохромами, помещается в поток дисперсионной среды, пропускаемый через проточную ячейку.

Гидродинамическое фокусирование струи клеточной суспензии в струе дисперсионной среды приводит к тому, что исследуемые клетки или их ядра выстраиваются поодиночке и в таком порядке пересекают пучок сфокусированных световых (обычно лазерных) лучей.

Под воздействием определенных световых волн происходит одновременное возбуждение молекул разных флуоресцирующих красителей, что делает возможным анализ сразу нескольких параметров клеточных структур.

Свет, исходящий от флуорохромов, фокусируют при помощи оптической системы, состоящей из нескольких зеркал и линз, а затем раскладывают на определенные компоненты.

Полученные световые сигналы подвергают анализу и преобразованию в электрические импульсы, а затем – в определенные формы, приемлемые для компьютерной обработки и хранения полученной информации.

Флуорохромы

Для того чтобы облегчить процесс определения клеточных структур в ходе процедуры проточной цитометрии, используемую дисперсионную среду подкрашивают специальными флуоресцирующими красителями – флуорохромами.

После такой обработки исследуемые клетки приобретают способность флуоресцировать (светиться) под воздействием пучка световых лучей.

При выборе того или иного красителя пользуются целым рядом критериев:

  • Используемый флуорохром должен быть специфичным по отношению к исследуемой ДНК.
  • Спектральные характеристики красителя должны соответствовать возможностям используемой аппаратуры.
  • Немаловажным фактором является стоимость флуорохрома (она не должна быть очень высокой).
  • Используемые красители должны быть удобны в работе (обладать стабильностью и хорошей растворимостью).

Одним из самых востребованных флуорохромов является йодистый пропидий: его спектральные характеристики идеально подходят для выполнения проточной цитометрии.

Чтобы активизировать флуоресценцию, используя йодистый пропидий, исследователи прибегают к помощи обычного аргонового лазера (рабочая длина его волны составляет 480 нм). Площадь флуоресцирующего участка такова, что позволяет использовать вышеозначенный флуорохром для выполнения многопараметрических измерений.

Для проведения проточной цитометрии также используют:

  • изотиоцианат флуоресцеина;
  • фикоэритрины (Су5, Су7, техасский красный);
  • аллофикоцианин;
  • Перидинин-Хлорофилл Протеин.

В качестве флуорохромов могут использоваться также флуоресцирующие моноклональные антитела.

Вне зависимости от того, какой именно краситель принимает участие в процедуре, его количество должно быть прямо пропорционально содержанию ДНК в структуре клетки.

Чтобы добиться качественного прокрашивания всех клеточных структур, количество применяемого флуорохрома должно быть избыточным.

Большинство флуорохромов, вступающих в контакт с ДНК, не способно пройти сквозь мембраны неповрежденных (интактных) клеток. Для повышения проницаемости клеточных мембран исследуемые клетки обрабатывают поверхностно-активными веществами (детергентами) или спиртом.

Преимущества

Несомненными преимуществами проточной цитометрии можно считать:

  • Высокую (до ста тысяч эпизодов в секунду) скорость выполнения анализа.
  • Возможность определения клеточных субпопуляций.
  • Способность выполнить анализ огромного (до 108 элементов в одном мл дисперсионной среды) количества клеток.
  • Возможность определения параметров любых клеток и клеточных структур (в том числе и редко встречающихся).
  • Высокую степень объективности в измерении интенсивности свечения (флуоресценции).

Где применяется?

Спектр применения проточной цитометрии необыкновенно широк. Она применяется даже в индустрии, для контроля производственного процесса. Продемонстрируем это, для наглядности представив информацию в виде списков.

В онкологии

В этом разделе медицины проточную цитометрию применяют с целью:

  • количественного анализа внутриклеточных структур (ДНК);
  • исследования основных параметров клеточного цикла;
  • идентификации и подсчета клеток, относящихся к разным периодам клеточного цикла;
  • обнаружения анеуплоидных клонов (аномальных клеток с нестандартным набором хромосом), свидетельствующих о развитии острого лейкоза;
  • выявления степени пролиферативной активности (тенденции к активному делению) анеуплоидных клонов;
  • обнаружения опухолевых маркеров;
  • наблюдения за состоянием пациентов, находящихся в группе риска;
  • оценки функционирования иммунной системы и функциональной состоятельности иммунных клеток;
  • выявления субпопуляций лимфоцитов (эта характеристика позволяет оценить состояние иммунитета).

о методе проточной цитометрии в диагностике острых лейкозов:

Иммунологии

Метод проточной цитометрии позволяет:

  • осуществить иммунофенотипирование (определить тип и функциональное состояние) клеток крови;
  • установить фагоцитарную активность иммунных клеток (об этом свидетельствует захват бактерий, помеченных флуоресцирующими красителями);
  • идентифицировать внутриклеточные белки;
  • определить степень пролиферативной активности;
  • исследовать стадии клеточного цикла;
  • оценить степень цитотоксичности (защитного механизма, позволяющего на внутриклеточном уровне уничтожать простейшие организмы, бактерии и вирусы) клеток.

Цитологии

Проточная цитометрия дает исчерпывающие данные, позволяющие:

  • безошибочно установить цитоморфологические характеристики любой клетки (ее размеры, уровень асимметричности, соотношение между ядром и цитоплазмой);
  • оценить активность ферментов, входящих в состав клетки;
  • проанализировать стадии клеточного цикла;
  • измерить физиологические внутриклеточные параметры (уровень pH, потенциал клеточной мембраны, концентрацию свободных ионов).

Гематологии

С помощью проточной цитометрии гематологи могут:

  • проанализировать субпопуляционный состав кровяных клеток;
  • подсчитать количество ретикулоцитов и тромбоцитов с помощью специфических маркеров;
  • оценить последствия резидуальной (остаточной, не до конца излеченной) болезни;
  • диагностировать острый лейкоз;
  • выполнить дифференциальную диагностику реактивного лимфоцитоза и лимфопролиферативных болезней (недугов, при которых поражаются клетки, имеющие лимфоидную природу);
  • осуществить диагностику заболеваний лимфопролиферативной этиологии.

Фармакологии

Проточная цитометрия помогает фармакологам:

  • установить уровень экспрессии (чувствительности опухолей разных локализаций к лечению лекарственными препаратами) белковых маркеров;
  • измерить активность ферментов, входящих в состав клеток;
  • занимающимся изучением действия биоактивных веществ на состояние клеток человеческого организма, определить любую стадию клеточного цикла.

Сельском хозяйстве

Метод проточной цитометрии активно используется учеными, специализирующимися на селекции новых видов растений и выведении пород домашнего скота, поскольку она позволяет:

  • определить плоидность (количество одинаковых хромосомных наборов в ядрах) клеток;
  • произвести анализ любой стадии клеточного цикла;
  • выполнить анализ содержимого протопластов (бактериальных или растительных клеток), а также произвести их сортировку в соответствии с заданными параметрами.

Источник: http://gidmed.com/onkologiya/diagnostika-onk/protochnaya-tsitometriya.html

Проточная цитометрия: преимущества метода и область применения – ODSIS Медицинский портал

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Количественная цитометрия – относительно новая методика микробиологического исследования дисперсионных сред, проводимая с помощью специального оборудования. Цитометрия бывает статической и проточной.

Статическая цитометрия проводится с использованием конфокальных микроскопов; при их отсутствии в ход идут слегка модифицированные люминесцентные микроскопы, оснащенные простыми и дешевыми системами анализа изображений.

Проточная цитометрия осуществляется на специальных аппаратах – сортерах и проточных цитрометрах.

Оба варианта количественной цитометрии имеют широчайшие возможности применения в практике медицинских и биологических исследований. Несмотря на разность используемого клинического материала и экспериментальных моделей решаемые ими задачи подчиняются общим принципам исследования.

Автоматизация проточной цитометрии

Принцип метода проточной цитометрии в клинической лабораторной диагностике

Этотметод должен сохраняться на вооружениив любой лаборатории, выполняющейгематологиче­ские исследования,поскольку является «золотым стандартом».

Преимуществасовременных проточных анализаторовдля под­счета и оценки форменныхэлементов крови состоят в следующем:высокая производительность (до 100—120проб крови в час); мик­роанализ (объемпробы — 12—150 мкл крови); анализ большогомассива (десятки тысяч) клеток; высокаяточность (правильность и воспроизводимость);большое количество одновременноопре­деляемых и рассчитываемыхпараметров (более 20); графическоепредставление результатов исследований(гистограммы, скето-граммы).

Технологияавтоматического подсчета клеток быларазработа­на в 1947 г. братьями Култер.Метод получил название апертуро-импедансного(или метод электрического импеданса,кондукто-метрический метод, методКултер).

Принципметода.

Методоснован на подсчете числа и определе­ниихарактера импульсов, возникающих припрохождении клеток через отверстиемалого диаметра (апертуру) в узкойкапил­лярной трубке диаметром порядка100 мкм, по обе стороны от которойрасположены изолированные друг от другаэлектроды сети постоянного тока.

Есличерез этот узкий канал, заполненныйэлек­тропроводящим раствором, проходитклетка крови, то в этот мо­ментсопротивление электрическому току вканале слегка возра­стает (рис. 11.2),это изменение улавливают современныеэлект­ронные приборы.

Таким образом,каждый случай прохождения клетки черезканал сопровождается появлениемэлектрического импульса, и для тогочтобы подсчитать концентрацию клеток,необходимо пропустить через негоопределенный объем суспен­зии клетокв электропроводящем растворе и сосчитатьчисло элек­трических импульсов,которые при этом образуются.

Еслив канале одномоментно находятся двеклетки, то образу­ется один импульс,и это приведет к ошибке подсчета клеток.

Для исключения этих ошибок пробу кровиразводят до такой концен­трацииклеток, при которой в канале датчикавсегда будет не бо­лее одной клетки.При характерном диаметре канала 80 мкми его длине 100 мкм, объем измерительногоканала получается 0,5 мм3.

В этом случае, чтобы уменьшить концентрациюклеток крови до нужной величины,необходимо выполнить разведение кровив 25 000 раз.

Задачаразделения эритроцитов и тромбоцитовв проточных анализаторах решается путемизмерения амплитуды (высоты) элек­трическогосигнала. Тромбоциты — клетки, меньшиепо разме­рам, чем эритроциты, ониобразуют импульсы низкой амплиту­ды,а сравнительно большие по размерамэритроциты дают им­пульсы высокойамплитуды.

Устройство, разделяющееимпульсы по величине амплитуды, называетсядискриминатором. В совре­менныхгематологических анализаторах встроенымногоканальные дискриминаторы. Посколькукаждый канал соответствует опреде­ленномуобъему клеток (рис. 11.3), они дают детальнуюинформа­цию о размерах клеток в видегистограмм (рис. 11.

4).

Послевыделения на гистограмме зоны объемовклеток, соот­ветствующих эритроцитам,и после суммирования данных,заре­гистрированных по всем каналамдискриминатора, получают об­щееколичество эритроцитов (они в современныханализаторах обозначаются аббревиатуройRBC(от англ. redbloodcells)),про­шедших через датчик.

При суммированиирезультатов подсчета эритроцитов,полученное в каждом канале значениеумножают на объем соответствующегоканала, в результате автоматическивычисляют объем, который занимаютэритроциты в крови, т.е. значениегематокрита НСТ.

При делении величиныгематокрита на концентрацию эритроцитовполучают характеристику эритроци­тов— средний корпускулярный объем (meancorpuscularvolume— MCV).Этот показатель используют также длярасчета коэффици­ента вариации объемаэритроцитов и обозначают как RDW(redcelldistributionwidth).

Он является показателем гетерогенностиэритроцитов по объему, характеризуетстепень анизоцитоза.

Ана­логичнымобразом измеряют концентрацию тромбоцитов— PLT(platelet),тромбокрит — РСТ (plateletcrit),средний объем тромбоцитов (meanplateletvolume— MPV),ширину распределе­ния тромбоцитовпо объему (plateletdistributionwidth— PDW),рассчитывают как коэффициент вариациитромбоцитометрической кривой. Этотпоказатель количественно отражаетгетерогенность популяции тромбоцитовпо объему, т. е. степень анизоцитозатром­боцитов.

Вотличие от ручного подсчета тромбоцитов,при котором про­водят предварительныйлизис эритроцитов, в проточныхгемоци-тометрах подсчет эритроцитов итромбоцитов выполняют в одной камеребез предварительной обработки крови.

При этом возника­ют проблемыдифференцировки больших форм тромбоцитов(макротромбоцитов) и сравнимых с нимипо объему эритроцитов (микроцитов), ихфрагментов (шизоцитов), а такжеотшнуровав-шихся фрагментов цитоплазмылейкоцитов (клеточный дебрис).

Дляпредупреждения подсчета одних элементоввместо других в кондуктометрическихсчетчиках анализируется не толькоамп­литуда электрического импульса,но и его форма. Встроенные дискриминаторыопределяют высоту электрическогосигнала, пропорциональную размеручастицы, и ширину (длительность) импульсов.

Таким образом, все импульсы, соответствующиераз­мерам частиц от 1,8 до 30,0 фл,подсчитываются как тромбоциты.

Еслиамплитуда импульса превышаетсоответствующую размерам 30 фл, появляетсясообщение «MicroRBC»,либо «Масго PLT»,при этом происходит автоматическаякоррекция количества тром­боцитов ивыдается истинный результат.

Посколькуразмеры эритроцитов и лейкоцитов близки,разде­лить их по величине амплитудыэлектрического импульса невоз­можно.Поэтому лейкоциты вносят некоторыйвклад в подсчет эритроцитов.

Но вкладэтот, за исключением явных лейкоцито­зов,ничтожно мал, им можно пренебречь, таккак в норме кон­центрация эритроцитовв крови на три порядка выше концентра­циилейкоцитов.

Для раздельного определенияконцентрации лей­коцитов (whitebloodcells— WBC)и эритроцитов в крови ис­пользуютразличие свойств мембран этих клетокк действию ге-молитиков.

Эритроцитылегко лизируются под действиемповерхностно-активных веществ.Претерпевающие при этом некоторыеизмене­ния лейкоциты остаются целымии могут быть подсчитаны.

По­этомуперед подсчетом лейкоцитов вкондуктометрических счет­чиках,прежде, чем пропустить кровь черезапертуру датчика, к ней добавляютраствор, лизирующий эритроциты.

Мелкиефраг­менты, до которых разрушаютсяэритроциты, дают электриче­скиеимпульсы очень низкой амплитуды и немешают определе­нию лейкоцитов.

Вовсех современных проточных цитометрахесть возможность для определенияконцентрации гемоглобина с помощьювстро­енных в них гемоглобинометров.

Поэтому кроме определения кон­центрациигемоглобина НЬ, имеется возможностьрассчитать сред­нее содержаниегемоглобина в эритроците (meancorpuscularhemoglobin— МСН) в пикограммах, которое оченьважно знать при разделении анемий нанормохромные, гипо- и гиперхром-ные.

Среднее содержание гемоглобина являетсяболее объектив­ным показателем, чемцветной показатель, не отражающий синтезгемоглобина в эритроците и его содержаниев нем. Метод позво­ляет рассчитатьтакже среднюю концентрацию гемоглобинав эритроците (meancorpuscularhemoglobinconcentration— MCHC),которая отражает истинное насыщениеэритроцита гемоглоби­ном.

Получаемуюв результате проточной цитометрииинформацию можно разделить на двеосновные группы — параметры непосред­ственноизмеряемые на этих анализаторах, напримерRBC,PLT,WBC,НЬ, и расчетные параметры, такие, какMCV,МСН, MCHC,РСТ, PCV,PCDи др.

Гистограммыраспределения отдельных типов клетоккрови по размерам, которые также выдаютсяпри этом автоматическом ана­лизе, каки возможность получения новых параметров,по срав­нению с ручными визуальнымиизмерениями избавили специа­листовлабораторий от необходимости использоватьтрудоемкие методы.

Спомощью автоматических счетчиков клетоккрови можно не только оценить размерыклеток, но и получить цитохимические идругие характеристики клеток крови.Они анализируют около 10 ООО клеток водном образце и имеют несколько различныхка­налов для подсчета клеток иопределения гемоглобина.

Современныецитометры наряду с кондуктометрическимме­тодом могут быть оснащены устройствамидля оценки рассеяния света лазера, чтодает возможность строить скетограммы,т. е. ди­аграммы распределения клетокпо их способности рассеивать светлазера. Это позволяет более четковыделять различные группы кле­точныхэлементов, отличающиеся не только поразмеру, но и по зернистости.

Технологииавтоматизированной цитометрии. Можновыделить несколько типов технологийдля дифференциального подсчета клеток,лейкоцитов и лейкоцитарной формулы,реализованных в высокотехнологичныхгематологических анализаторах.

Радиочастотныйанализ. Припрохождении клеткой апертурно-гоотверстия в токе высокой частотывозникают сигналы, кото­рые отражаютхарактер внутренней структуры клетки.

Технологияпероксидазного канала. Этопроточная цитохимичес­кая технология,позволяющая дифференцировать лейкоцитына основе различной активности пероксидазыв них.

Активность это­го ферментанаиболее выражена в эозинофилах инейтрофилах, слабую реакцию даютмоноциты, в лимфоцитах она не выявляет­ся.

При этом измеряется рассеяние клеткамисвета от луча лазера (так определяетсяразмер клеток) и поглощение клеткойсвета (оценка активности пероксидазыв клетке).

ТехнологияVCS— трехмерный анализ дифференциациилейкоци­тов. Технологияоснована на одновременном компьютерномана­лизе клеток по трем направлениям:объем (volume),электропро­водность (conductivity),дисперсия лазерного света (laserscatter).

Полученные по трем каналам данныекомбинируются и анализи­руются спомощью компьютера, в результатепроисходит распре­деление клеток подифференцировочным кластерам, и, такимобразом, лейкоциты разделяются на пятьосновных популяций: лимфоциты, моноциты,нейтрофилы, эозинофилы, базофилы.

ТехнологияMAPSS—изменение дисперсии лазерного светаклет­ками. Этомногоугловая система лазерногосветорассеяния, или поляризациямногоуглового светорассеяния, т. е.регистрация ин­тенсивности светорассеянияклетками поляризованного лазерно­голуча под разными углами.

Технологиякомпьютерного анализа дисперсиилазерного света клетками крови примененав гемато­логических автоанализаторахфирмы «Abbott»для дифференциа­ции эозинофилов ибазофилов.

С помощью этой технологиимогут быть получены сведения о различныхсвойствах клеток и в резуль­тате нагематологических анализаторах строятсяскетограммы лей­коцитов крови.

Технологияс использованием специфическогохимического лизиса лейкоцитов. Технологияоснована на предварительной обработкелейкоцитов реактивами, вызывающимидифференцированный лизис всех клеток,за исключением лейкоцитов определеннойпопуляции (эозинофилов или базофилов).Затем проводят диск-риминантный анализвсех клеток по размеру и сложностиструк­туры.

Измерениефлюоресценции красителей, связанных сизбиратель­ными клеточными структурами.Технологиялежит в основе про­точной цитофлюориметрии.Наибольшее применение в цитофлюо-риметриинашли методики распределения клетокпо содержанию ДНК и флюоресцентныеметки клеток антителами(иммунофено-типирование), которые можноприменить одновременно на од­номобразце.

Впроточных цитометрах флюоресценцияимеет несколько пре­имуществ:флюоресцентное излучение прямопропорционально специфическим клеточнымкомпонентам, концентрация флюо-рохромов,используемых для исследования клетки,очень низкая, нефлюоресцирующиесоединения могут становитьсяфлюоресци­рующими при взаимодействиис внутриклеточными структурами илиферментами.

Источник: https://studfile.net/preview/6886650/page:5/

МедПомощь
Добавить комментарий